កញ្ចប់ PCR ពេលវេលាពិតនៃមេរោគ Monkeypox
ពត៌មានលម្អិតនៃផលិតផល
គោលបំណងប្រើប្រាស់
វាត្រូវបានប្រើសម្រាប់ការរកឃើញមេរោគ Monkeypox នៅក្នុងសេរ៉ូមមនុស្ស ឬសំណាកសំណល់នៃដំបៅដោយប្រើប្រព័ន្ធ PCR ពេលវេលាពិត។
គោលការណ៍សាកល្បង
ផលិតផលនេះគឺជាប្រព័ន្ធតេស្ត PCR តាមពេលវេលាជាក់ស្តែង Taqman® ដែលមានមូលដ្ឋានលើ fluorescent ។ថ្នាំ primers និង probes ជាក់លាក់ត្រូវបានរចនាឡើងសម្រាប់ការរកឃើញហ្សែន F3L នៃមេរោគ Monkeypox ។ការត្រួតពិនិត្យផ្ទៃក្នុងកំណត់គោលដៅហ្សែនអភិរក្សរបស់មនុស្ស ត្រួតពិនិត្យការប្រមូលសំណាក ការគ្រប់គ្រងគំរូ និងដំណើរការ PCR តាមពេលវេលាជាក់ស្តែង ដើម្បីជៀសវាងលទ្ធផលមិនពិត-អវិជ្ជមាន។កញ្ចប់នេះគឺជាប្រព័ន្ធ lyophilized premix ពេញលេញ ដែលរួមបញ្ចូលទាំងសម្ភារៈដែលត្រូវការសម្រាប់ការរកឃើញមេរោគ Monkeypox: អង់ស៊ីម amplification អាស៊ីត nucleic, អង់ស៊ីម UDG, សតិបណ្ដោះអាសន្នប្រតិកម្ម, primer ជាក់លាក់ និងការស៊ើបអង្កេត។
ខ្លឹមសារសំខាន់ៗ
សមាសធាតុដែលបានផ្តល់ត្រូវបានរាយក្នុងតារាង។
| សមាសធាតុ | កញ្ចប់ | គ្រឿងផ្សំ |
| មេរោគ MonkeypoxLyophilized Premix | 8 បន្ទះ PCR បំពង់× 6 ថង់ | ថ្នាំ primers, probes, dNTP/dUTP Mix, Mg2+, Taq DNA polymerase, UDG Enzyme |
| MPV ការត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមាន | 400 μL × 1 បំពង់ | លំដាប់ DNA ដែលមានហ្សែនគោលដៅ |
| ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន MPV | 400 μL × 1 បំពង់ | លំដាប់ DNA ដែលមានផ្នែកហ្សែនរបស់មនុស្ស |
| ដំណោះស្រាយរំលាយ | 1 mL × 1 បំពង់ | ឧបករណ៍ទប់លំនឹង |
| វិញ្ញាបនបត្រនៃការអនុលោម | 1 ដុំ | / |
លំហូរប្រតិបត្តិការ
1. គំរូបណ្តុំ៖សំណាកគួរត្រូវបានប្រមូលចូលទៅក្នុងបំពង់មាប់មគស្របតាម
ជាមួយនឹងលក្ខណៈបច្ចេកទេសស្តង់ដារ។
2. ការរៀបចំ Reagent (តំបន់ត្រៀម Reagent)
យកគ្រឿងផ្សំរបស់ឧបករណ៍ចេញ ធ្វើឱ្យវាមានតុល្យភាពនៅសីតុណ្ហភាពបន្ទប់សម្រាប់ការរង់ចាំប្រើ។
3. ការកែច្នៃសំណាក (តំបន់កែច្នៃគំរូ)
3.1 ការទាញយកអាស៊ីតនុយក្លេអ៊ែរ
វាត្រូវបានផ្ដល់អនុសាសន៍ឱ្យយកសំណាករាវ 200μL ការត្រួតពិនិត្យជាវិជ្ជមាន និងការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមានសម្រាប់ការទាញយកអាស៊ីត nucleic យោងទៅតាមតម្រូវការ និងនីតិវិធីដែលត្រូវគ្នានៃកញ្ចប់ទាញយក DNA មេរោគ។
3.2 ការរំលាយម្សៅ Lyophilized និងការបន្ថែមគំរូ
រៀបចំថ្នាំ Monkeypox Virus Lyophilized premix តាមចំនួនសំណាក។គំរូមួយត្រូវការបំពង់ PCR មួយដែលមានម្សៅ Lyophilized premix ។ការគ្រប់គ្រងអវិជ្ជមាន និងការគ្រប់គ្រងវិជ្ជមានគួរតែត្រូវបានចាត់ទុកជាគំរូពីរ។
(1) បន្ថែម 15μL ដំណោះស្រាយរំលាយទៅក្នុងបំពង់ PCR នីមួយៗដែលមានសារធាតុ Lyophilized premix បន្ទាប់មកបន្ថែម 5μL ដកស្រង់សំណាក/ ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន/ ការត្រួតពិនិត្យវិជ្ជមានទៅក្នុងបំពង់ PCR នីមួយៗរៀងៗខ្លួន។
(2) គ្របបំពង់ PCR ឱ្យតឹង ផ្លុំបំពង់ PCR ដោយដៃរហូតដល់ម្សៅ lyophilized ត្រូវបានរំលាយទាំងស្រុង និងលាយបញ្ចូលគ្នា ប្រមូលអង្គធាតុរាវទៅបាតបំពង់ PCR ដោយ centrifugation ល្បឿនទាបភ្លាមៗ។
(3) ប្រសិនបើប្រើឧបករណ៍ PCR ពេលវេលាពិតធម្មតាសម្រាប់ការរកឃើញ បន្ទាប់មកផ្ទេរបំពង់ PCR ដោយផ្ទាល់ទៅកាន់តំបន់ពង្រីក។ប្រសិនបើប្រើ BTK-8 សម្រាប់ការរកឃើញ នោះចាំបាច់ត្រូវធ្វើប្រតិបត្តិការដូចខាងក្រោមៈ ផ្ទេរអង្គធាតុរាវ 10 μL ពីបំពង់ PCR ទៅអណ្តូងប្រតិកម្មនៃ BTK-8 ។បំពង់ PCR មួយត្រូវគ្នានឹងអណ្តូងមួយនៅលើបន្ទះឈីប។កំឡុងពេលប្រតិបត្តិការដាក់បំពង់ សូមប្រាកដថា បំពង់ទុយោគឺបញ្ឈរ 90 ដឺក្រេ។គន្លឹះនៃរបាំងការពារ aerosol គួរតែត្រូវបានដាក់នៅកណ្តាលអណ្តូងដោយកម្លាំងមធ្យម ហើយបញ្ឈប់ការរុញ pipette នៅពេលដែលវាទៅដល់ប្រអប់ទីមួយ (ដើម្បីកុំឱ្យមានពពុះ)។បន្ទាប់ពីអណ្តូងត្រូវបានបំពេញ យកភ្នាសបន្ទះសៀគ្វីប្រតិកម្មចេញ ដើម្បីគ្របដណ្តប់អណ្តូងទាំងអស់ ហើយបន្ទះឈីបត្រូវបានផ្ទេរទៅតំបន់រកឃើញការពង្រីក។
4. ការពង្រីក PCR (តំបន់រកឃើញ)
4.1 ដាក់បំពង់ PCR / បន្ទះសៀគ្វីប្រតិកម្មទៅក្នុងធុងប្រតិកម្ម ហើយកំណត់ឈ្មោះប្រតិកម្មនីមួយៗឱ្យបានល្អតាមលំដាប់ដែលត្រូវគ្នា។
4.2 ការកំណត់នៃការរកឃើញ fluorescence: (1) មេរោគ Monkeypox (FAM);(2) ការត្រួតពិនិត្យផ្ទៃក្នុង (CY5) ។
4.3 ដំណើរការពិធីការជិះកង់ខាងក្រោម
ពិធីការ ABI7500, Bio-Rad CFX96, SLAN-96S, QuantStudio៖
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត | |
| 1 | មុន denaturation | ៩៥ អង្សាសេ | 2 នាទី | 1 |
| 2 | ការប្រែពណ៌ | ៩៥ អង្សាសេ | 10 វិ | 45 |
| Annealing, extension, ទទួលបាន fluorescence | 60 ℃ | 30 វិ | ||
ពិធីសារ BTK-8៖
| ជំហាន | សីតុណ្ហភាព | ពេលវេលា | វដ្ត | |
| 1 | មុន denaturation | ៩៥ អង្សាសេ | 2 នាទី | 1 |
| 2 | ការប្រែពណ៌ | ៩៥ អង្សាសេ | 5 វិ | 45 |
| Annealing, extension, ទទួលបាន fluorescence | 60 ℃ | ១៤ ស | ||
5. ការវិភាគលទ្ធផល (សូមមើលសៀវភៅណែនាំអ្នកប្រើប្រាស់ឧបករណ៍)
បន្ទាប់ពីប្រតិកម្ម លទ្ធផលនឹងត្រូវបានរក្សាទុកដោយស្វ័យប្រវត្តិ។ចុច "វិភាគ" ដើម្បីវិភាគ ហើយឧបករណ៍នឹងបកស្រាយតម្លៃ Ct នៃគំរូនីមួយៗនៅក្នុងជួរឈរលទ្ធផលដោយស្វ័យប្រវត្តិ។លទ្ធផលត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន និងវិជ្ជមានត្រូវអនុវត្តតាម "6. ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព" ខាងក្រោម។
6. ការត្រួតពិនិត្យគុណភាព
6.1 ការត្រួតពិនិត្យអវិជ្ជមាន៖ គ្មាន Ct ឬ Ct>40 នៅក្នុងឆានែល FAM, Ct≤40 នៅក្នុងឆានែល CY5 ជាមួយនឹងខ្សែកោង amplification ធម្មតា។
6.2 ការត្រួតពិនិត្យជាវិជ្ជមាន: Ct≤35 នៅក្នុងឆានែល FAM ជាមួយនឹងខ្សែកោង amplification ធម្មតា Ct≤40 នៅក្នុងឆានែល CY5 ជាមួយនឹងខ្សែកោង amplification ធម្មតា។
6.3 លទ្ធផលមានសុពលភាពប្រសិនបើលក្ខណៈវិនិច្ឆ័យខាងលើត្រូវបានបំពេញ។បើមិនដូច្នោះទេ លទ្ធផលគឺមិនត្រឹមត្រូវទេ។
ការបកស្រាយលទ្ធផល
លទ្ធផលខាងក្រោមអាចធ្វើទៅបាន៖
| តម្លៃ Ct នៃឆានែល FAM | តម្លៃ Ct នៃឆានែល CY5 | ការបកស្រាយ | |
| 1# | គ្មាន Ct ឬ Ct>40 | ≤40 | មេរោគ Monkeypox អវិជ្ជមាន |
| 2# | ≤40 | លទ្ធផលណាមួយ។ | មេរោគ Monkeypox វិជ្ជមាន |
| 3# | ៤០ ដល់ ៤៥ | ≤40 | ការធ្វើតេស្តឡើងវិញ;ប្រសិនបើវានៅតែ 40 ~ 45 រាយការណ៍ជា 1# |
| 4# | គ្មាន Ct ឬ Ct>40 | គ្មាន Ct ឬ Ct>40 | មិនត្រឹមត្រូវ |
ចំណាំ៖ ប្រសិនបើលទ្ធផលមិនត្រឹមត្រូវកើតឡើង គំរូចាំបាច់ត្រូវប្រមូល និងសាកល្បងម្តងទៀត។
ព័ត៌មានបញ្ជាទិញ
| ឈ្មោះផលិតផល | ឆ្មា។ទេ | ទំហំ | សំណាក | ជីវិតធ្នើ | ឆ្លងកាត់។& ស្តូ។សីតុណ្ហភាព |
| កញ្ចប់ PCR ពេលវេលាពិតនៃមេរោគ Monkeypox | B001P-01 | 48 តេស្ត / កញ្ចប់ | សេរ៉ូម / សារធាតុ exudate | 12 ខែ | -25 ~ 15 ℃ |
